Imunokemijska karakterizacija protutijela za membranski protein Na+/K+-ATPazu u tkivima ribe zebrice (Danio rerio)

master's thesis

• Title (english): Immunochemical characterization of the antibody for membrane protein Na+/K+-ATPase in Zebrafish (Danio rerio) tissues
• Author: Arvena Bošnjak
• Mentor: Dean Karaica (mentor)
• Mentor: Duje Lisičić (komentor)
• Committee member: Duje Lisičić (predsjednik povjerenstva)
• Committee member: Sandra Hudina (član povjerenstva)
• Committee member: Blanka Cvetko Tešović (član povjerenstva)
• Committee member: Ivan Čanjevac (član povjerenstva)
• Committee member: Luka Valožić (član povjerenstva)
• Granter: University of Zagreb; Faculty of Science; (Department of Biology); Zagreb
• Defense date and country: 2022-07-06, Croatia
• Scientific / art field, discipline and subdiscipline: NATURAL SCIENCES; Biology

Abstract

Riba zebrica, Danio rerio (Hamilton, 1822), modelni je organizam koji se danas sve više koristi u
ekotoksikološkim i biomedicinskim istraživanjima. Kao i drugi kralježnjaci, ribe svoju osmotsku
homeostazu organizma održavaju radi normalnog funkcioniranja fizioloških procesa. Natrij-kalij ATP-aza
fiziološki je važan integralni membranski protein čija lokalizacija i razvojno-uvjetovana ekspresija u
tkivima zebrice još uvijek nije u potpunosti istražena. Imunohistokemija je česta metoda istraživanja
lokalizacije proteina u tkivima/stanicama sisavaca, kod koje postupak/odabir fiksacije može doprinijeti
maskiranju epitopa te onemogućiti protutijelima uspješno vezanje za svoje specifično mjesto. No, korištenje
optimalnih metoda otkrivanja epitopa može značajno poboljšati vezanje korištenog protutijela. Stoga je cilj
ovog istraživanja bio utvrditi optimalne uvjete za korištenje protutijela a6F upotrebom različitih metoda
otkrivanja epitopa u imunofluorescencijskoj analizi kriopreparata ribe zebrice. Koristeći utvrđene optimalne
uvjete cilj je bio istražiti postojanje novih lokalizacija i postojanje razvojno-uvjetovane ekspresije proteina
Na+/K+-ATP-aze tijekom prvih 120 h embrionalnog razvoja ribe zebrice. Istraživanje je pokazalo da je
obrada kriopreparata deterdžentom SDS (engl. sodium dodecyl sulphate) uz razrjeđenje 1:400 protutijela
a6F optimalan uvjet za određivanje lokalizacije proteina Na+/K+-ATP-aze u ribi zebrici. Konačno,
otkriveno je da je lokalizacija α1 podjedinice natrij-kalij ATP-aze tkivno specifična te je da je njezina
ekspresija razvojno- i zonski-uvjetovana.

Abstract (english)

Zebrafish, Danio rerio (Hamilton, 1822) is a model organism that is increasingly being used today in
ecotoxicology and biomedical studies. Fish, like other vertebrates, maintain their osmotic homeostasis to
keep processes in their organism in the physiological range. Currently, localization and stage-dependent
expression of Na+/K+-ATPase, an important membrane protein, in zebrafish tissue is not fully investigated.
Immunohistochemistry is a method which is commonly used for investigating protein localization in
mammalian tissues/cells. Choosing the right fixative/fixation procedure is an important step in this method
because it can lead to epitope masking that prevents antibodies from successful binding. The usage of
optimal antigen retrieval method can significantly improve antibody binding. Thus, the aim of this study
was to find optimal antigen retrieval method for determining the localization of Na+/K+-ATPase in
zebrafish cryosections. Furthermore, using these optimal conditions the study aimed to investigate the
existence of new localization sites and stage-related expression of Na+/K+-ATPase in zebrafish embryos.
The study showed that the optimal antigen retrieval method is treatment of cryosections with sodium
dodecyl sulfate (SDS) using 1:400 a6F antibody dilution. Finally, it showed that the localization of the
Na+/K+-ATPase α1 subunit is tissue specific with stage- and zone-dependent expression.

• Keywords: kriopreparati; imunofluorescencijska analiza; natrij-kalij ATP-aza; zebrica
• Keywords (english): cryosections; immunofluorescence analysis; sodium-potassium ATPase; zebrafish
• Language: croatian
• URN:NBN: urn:nbn:hr:217:238750
• Study programme: Title: Enviromental Sciences; Study programme type: university; Study level: graduate; Academic / professional title: magistar/magistra struke znanosti o okolišu (magistar/magistra struke znanosti o okolišu)
• Type of resource: Text
• File origin: Born digital
• Access conditions: Open access; Embargo expiration date: 2023-07-06
• Created on: 2022-07-22 10:42:29