Preusmjeravanje adenovirusa tipa 5 na integrin α4β1

diplomski rad

• Naslov (engleski): Retargeting adenovirus type 5 to integrin α4β1
• Autor: Tihana Jelušić
• Mentor: Andreja Ambriović Ristov (mentor)
• Član povjerenstva: Andreja Ambriović Ristov (predsjednik povjerenstva)
• Član povjerenstva: Dubravka Hranilović (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Mladen Krajačić (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Maja Matulić (član povjerenstva)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prirodoslovno-matematički fakultet; (Biološki odsjek); Zagreb
• Datum i država obrane: 2009, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: PRIRODNE ZNANOSTI; Biologija

Sažetak

Gensko preusmjeravanje Adenovirusa tipa 5 (Ad5) ugradnjom sljedova u vlakno bi trebalo omogućiti ciljani unos gena. Cilj je ovog istraživanja konstruirati replikacijski defektan adenovirusni vektor uvođenjem ciljnog liganda CPLDIDFYC za integrin α4β1 u HI petlju glave vlakna, kako bi se preusmjerio Ad5 na integrin α4β1 (poznat i pod imenom VLA-4, engl. very late antigen). Rekombinantni Ad5VLA-4 virus konstruiran je manipulacijom cjelovitog Ad5 genoma kao plazmida u E. coli, pri čemu je korištena homologna rekombinacija u bakterijama. Ad5VLA-4 i kontrolni virus Ad5wt bez ciljnog slijeda, umnoženi su u kulturi bubrežnih stanica ljudskog embrija 293 i pročišćeni u gradijentu cezijeva klorida. Koristeći model ljudskih stanica rabdomiosarkoma, koje eksprimiraju integrin α4β1, pokazali smo povećanu djelotvornost transdukcije s Ad5VLA-4 u usporedbi s Ad5wt. Prema tome Ad5VLA-4 bi se mogao koristiti za gensku terapiju tumora koji eksprimiraju integrin α4β1.

Sažetak (engleski)

Genetic retargeting of Adenovirus type 5 (Ad5) through insertion of sequences in the fiber protein should permit targeted gene delivery. The aim of this research is to construct replication defective adenoviral vector by incorporating α4β1 integrin-targeting ligand CPLDIDFYC into the HI-loop of the fiber protein, in order to retarget Ad5 to integrin α4β1 (also known as very late antigen 4, VLA-4). Construction of Ad5VLA-4 was performed by manipulation of the full length Ad5 genome as a stable plasmid in E. coli, using the bacterial homologous recombination machinery. Ad5VLA-4 and a control virus Ad5wt lacking targeting sequence, were multiplied in human embryonic kidney cell line-293 and purified by bending in CsCl gradients. On the rhabdomyosarcoma (RD) cell line, which express α4β1 integrin, Ad5VLA-4 exhibited increased transduction efficacy in comparison to Ad5wt. Therefore, Ad5VLA-4 could be suitable vector for gene therapy of tumors expressing α4β1 integrin.

• Ključne riječi: preusmjeravanje; adenovirus; integrin α4β1; VLA-4
• Ključne riječi (engleski): Ad retargeting; integrin α4β1; VLA-4
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:217:228201
• Studijski program: Naziv: Molekularna biologija; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: diplomski; Akademski / stručni naziv: magistar/magistra molekularne biologije (mag. biol. mol.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup
• Datum i vrijeme pohrane: 2018-03-12 11:11:36