Imunohistokemijska karakterizacija protutijela za membranske proteine Na+/K+ATPazu, neurolin i prijenosnik organskih kationa 1 u cjelovitim uzorcima zebrice (Danio rerio)

diplomski rad

• Naslov (engleski): Immunohistochemical characterization of Na+/K+ATP-ase, neurolin and organic cation membrane transporter 1 in zebrafish (Danio rerio) whole-mount samples
• Autor: Nora Lončarić
• Mentor: Dean Karaica (mentor)
• Mentor: Goran Klobučar (komentor)
• Član povjerenstva: Goran Klobučar (predsjednik povjerenstva)
• Član povjerenstva: Sandra Hudina (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Sven Jelaska (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Zoran Marčić (član povjerenstva)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prirodoslovno-matematički fakultet; (Biološki odsjek); Zagreb
• Datum i država obrane: 2022-09-26, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: PRIRODNE ZNANOSTI; Biologija

Sažetak

U posljednjih nekoliko desetljeća uporaba zebrice (Danio rerio) u biomedicinskim i toksikološkim
istraživanjima eksponencijalno raste. Brojne studije istražuju fiziološku/ekotoksikološku funkciju
specifičnih proteina lokaliziranih u različitim tkivima zebrice. Za takva istraživanja najčešće se
koristi metoda cjelokupnih preparata u kombinaciji s fluorescentnom mikroskopijom. Trenutno ne
postoji jedinstveni pristup za provođenje imunohistokemijskih analiza na cjelovitim uzorcima
embrija zebrica. U ovom radu upotrijebila sam embrije zebrice (120 sati nakon oplodnje) za
određivanje ključnih uvjeta pri pripremi cjelovitih uzoraka embrija zebrice za imunohistokemijsku
analizu pomoću antitijela za Na+
/K+¬ATPazu, ZN-8 i Oct1 membranske proteine. Dva fiksativa
(4% paraformaldehid i Dents fiksativ) i tri različite temperature inkubacije (37 °C/30 min, 70 °C/15
min, 95 °C/5 min) testirani su kako bi se optimizirala imunohistokemijska metoda na cjelovitim
uzorcima embrija zebrice. Rezultati su pokazali da upotreba različitih fiksativa i/ili obrade uzoraka
pri određenoj temperaturi određuje optimalno vezanje protutijela. Fiksacija uzoraka Dentovim
fiksativom je bila važna za detekciju proteina Na+
/K+ATPaze dok su fiksacija i inkubacija uzoraka
pri određenoj temperaturi bili važni za detekciju proteina ZN-8. Suprotno od toga, dizajnirana
protutijela za protein Oct1 zebrice nisu pokazala specifično vezanje u embrijima zebrica.
Zaključno, ovaj rad predstavlja jednostavan i objedinjen pristup za imunohistokemijsku
lokalizaciju različitih proteina u cjelovitim uzorcima zebrice.

Sažetak (engleski)

In the last couple of decades, the use of zebrafish (Danio rerio) model in biomedical and
toxicological research is exponentially increasing. Many studies investigate the
physiological/ecotoxicological function of different proteins localized across different zebrafish
tissues. Whole-mount preparations coupled with fluorescence microscopy are widely used for this
task. To date there is no single approach for conducting whole-mount immunohistochemistry in
zebrafish embryos. In this study we used zebrafish embryos (120 hours post fertilization) to
determine key parameters in preparation of zebrafish embryos for the use in whole-mount
immunohistochemistry by using four antibodies detecting Na+
/K+
- ATPase, ZN-8 and Oct1
membrane proteins. Two fixatives (4% paraformaldehyde and Dents fixative) and three different
incubation temperatures (37 °C/30 min, 70 °C/15 min, 95 °C/5 min) were tested to optimize the
whole-mount immunohistochemistry approach. Results showed that the use of different fixative
and/or sample incubation temperature determines optimal antibody binding. Fixation with Dents
fixative was essential for Na+
/K+
- ATPase detection whereas fixation and incubation temperature
were important factors for ZN-8 protein detection. In contrast, designed anti-zebrafish Oct1
antibodies did not show specific binding in zebrafish embryos. Overall, this work presents a simple
and unified approach for whole-mount immunohistochemistry localization of different proteins in
zebrafish embryos.

• Ključne riječi: kriopreparati; (imuno)fluorescencijska analiza; aktin; natrij-kalij ATP-aza; zebrica
• Ključne riječi (engleski): cryosections; (immuno)fluorescence analysis; actin; sodium-potassium ATPase; zebrafish
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:217:327562
• Studijski program: Naziv: Ekologija i zaštita prirode; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: diplomski; Akademski / stručni naziv: magistar/magistra ekologije i zaštite prirode (mag. oecol. et prot. nat.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup; Datum isteka embarga: 2024-09-26
• Datum i vrijeme pohrane: 2022-10-26 11:28:44