Proteomics-based approaches for validation of antibodies against OTR and V1aR

diplomski rad

• Naslov (hrvatski): Validacija antitijela za OTR i V1aR pristupima temeljenima na proteomici
• Autor: Bojan Kuridža
• Mentor: Markus Muttenthaler (mentor)
• Član povjerenstva: Marko Močibob (predsjednik povjerenstva)
• Član povjerenstva: Ivan Kodrin (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Iva Juranović Cindrić (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Đani Škalamera (član povjerenstva)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prirodoslovno-matematički fakultet; (Kemijski odsjek); Zagreb
• Datum i država obrane: 2023-06-06, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: PRIRODNE ZNANOSTI; Kemija

Sažetak

The oxytocin receptor (OTR) and the vasopressin 1a receptor (V1aR) are two G protein-coupled
receptors involved in mediating various physiological processes and social and sexual
behaviors. Producing specific antibodies to study these receptors is challenging due to their
sequence homology and structure similarity, along with two additional closely related
vasopressin receptors. Thus, this thesis aimed to validate ten antibodies to OTR and seven
antibodies to V1aR produced against distinctive receptor peptide epitopes, using western blot
and immunoprecipitation followed by mass spectrometry. The validation process pointed
towards one V1aR antibody (1G1), which showed promising results in both western blot and
immunoprecipitation experiments, and needs to be further tested. The best OTR antibody
identified in immunoprecipitation experiments (1B2) did not perform well in western blots.

Sažetak (hrvatski)

Oksitocinski receptor (OTR) i vazopresinski 1a receptor (V1aR) dva su receptora spregnuta sa
G-proteinom uključena u posredovanje raznih fizioloških procesa te društvenog i seksualnog
ponašanja. Proizvodnja specifičnih antitijela za proučavanje ovih receptora predstavlja izazov
zbog sličnosti njihovog slijeda i strukture, kao i sličnosti dva dodatna blisko povezana
vazopresinska receptora. Stoga, cilj je ovog rada bio validirati deset antitijela za OTR i sedam
antitijela za V1aR proizvedenih prema karakterističnim peptidnim epitopima receptora,
koristeći western blot i imunoprecipitaciju povezanu s masenom spektrometrijom. Jedno
antitijelo za V1aR (1G1) u procesu validacije pokazalo je obećavajuće rezultate u
eksperimentima western blota i imunoprecipitacije. Najbolje od OTR antitijela identificiranih
u eksperimentima imunoprecipitacije (1B2) nije se pokazalo uspješnim u western blotovima.

• Ključne riječi: antibody validation; G protein-coupled receptor; immunoprecipitation; mass spectrometry; oxytocin receptor; vasopressin 1a receptor; western blot
• Ključne riječi (engleski): imunoprecipitacija; masena spektrometrija; oksitocinski receptor; receptor spregnut sa G-proteinom; validacija antitijela; vazopresinski 1a receptor; western blot
• Jezik: engleski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:217:185973
• Studijski program: Naziv: Kemija; smjerovi: istraživački; Smjer: istraživački; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: diplomski; Akademski / stručni naziv: magistar/magistra kemije (mag. chem.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup
• Datum i vrijeme pohrane: 2023-06-09 10:18:20