Utjecaj uvjeta uzgoja i pojačane ekspresije odabranih gena na diferencijaciju ljudskih dopaminergičnih neurona

diplomski rad

• Naslov (engleski): Influence of cell culture conditions and enhanced expression of genes of interest in optimization of dopaminergic neuron generation
• Autor: Petra Terešak
• Mentor: Alberto Martinez Serrano (mentor)
• Mentor: Dubravka Hranilović (sumentor)
• Član povjerenstva: Dubravka Hranilović (predsjednik povjerenstva)
• Član povjerenstva: Višnja Besendorfer (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Petar Kružić (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Domagoj Đikić (član povjerenstva)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prirodoslovno-matematički fakultet; (Biološki odsjek); Zagreb
• Datum i država obrane: 2017-07-13, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: PRIRODNE ZNANOSTI; Biologija

Sažetak

Parkinsonova bolest (PB) je neurološki poremećaj koji je karakteriziran gubitkom mezencefaličkih dopaminergičkih (DA) neurona. Proizvodnja ovog tipa stanica omogućit će novi terapijski pristup koji trenutno nedostaje. Naime, trenutni farmakološki i kirurški tretmani ublažavaju simptome Parkinsonove bolesti, ali niti jedna terapija ne može spriječiti ili zaustaviti progresivni patološki učinak. Živčane matične stanice izolirane iz ventralnog mezencefaličkog ljudskog tkiva predstavljaju snažan istraživački alat i kandidati su za terapiju transplantacije stanica u PD. Istraživačka grupa dr. Martinez-Serrana razvila je besmrtnu staničnu liniju hNSCs uvođenjem gena v-myc ptičjeg retrovirusa u stanice. Ove stanične linije sadrže sva izvorna svojstva neuralnih matičnih stanica koje su u mogućnosti proliferirati u DAn. Ranije je pokazano da se prisiljenom ekspresijom gena Bcl-XL povećava razina dopaminergičnih neurona, no anti-apoptotička priroda Bcl-XL čini ga protoonkogenom pa se ne može koristiti u kliničke svrhe. Stoga je potrebno pronaći sigurnije gene sličnog učinka. Testirani geni od interesa su CDKN1C, GADD45G, GFRA1, INSM1 i NHLH1. Imunocitokemijska analiza pokazala je da geni GADD45G, GFRA1, INSM1 induciraju ekspresiju DA biljega, tirozin hidroksilaze i predstavljaju obećavajuću zamjenu za Bcl-xL. Dodatci za medije, B-27, N-2 i SCM005, testirani su kako bi se optimiziralo kultiviranje hNSC-a. Nije bilo značajnih razlika u učinkovitosti navedenih medijskih dodataka.

Sažetak (engleski)

Parkinson’s disease (PD) is a neurological disorder characterized by the loss of midbrain dopaminergic (DA) neurons. The generation of this cell type will fulfill a currently unmet therapeutic need. Current pharmacological and surgical treatments alleviate parkinsonian symptoms, but none can prevent or stop the progressive pathology effect. Human neural stem cells derived from the ventral mesencephalon are powerful research tools and candidates for cell therapies in PD. The Dr. Martinez-Serrano research group were able to develop an immortalized cell line of hNSCs by introducing the avian retroviral v-myc gene into the cells. The cell lines provide all the genuine properties of NSC that act as precursors of human DAn. Previous studies proved that a forced expression of Bcl-xL enhance the generation of dopaminergic neurons. The anti-apoptotic nature of Bcl-xL makes it a protooncogene that cannot be used for clinical applications. Therefore it is necessary to find an alternative and safer genes which can work in a similar way. The selected genes of interest that were tested were CDKN1C, GADD45G, GFRA1, INSM1 and NHLH1. Immunocytochemical analysis demonstrated that GADD45G, GFRA1, INSM1 genes induced the expression of the DA marker, tyrosine hydroxylase, and could be good substitutes of Bcl-xL. Media supplements, B-27, N-2 and SCM005, were tested to optimize hNSC culturing. No substantial difference was recorded between media supplements.

• Ključne riječi: Parkinsonova bolest; transplantacija stanica; tirozin- hidroksilaza; geni od interesa; živčane matične stanice
• Ključne riječi (engleski): Parkinson’s disease; cell replacement therapy; tyrosine hydroxylase; genes of interest; media supplement; human neural stem cells
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:217:687014
• Studijski program: Naziv: Molekularna biologija; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: diplomski; Akademski / stručni naziv: magistar/magistra molekularne biologije (mag. biol. mol.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup
• Datum i vrijeme pohrane: 2017-09-07 11:28:31