Ispitivanje bioloških učinaka seskviterpena iz biljke Centaurea ragusina L.

diplomski rad

• Naslov (engleski): Investigation of biological effects of sesquiterpene from Centaurea ragusina L.
• Autor: Juran Kralj
• Mentor: Anamaria Brozović (mentor)
• Mentor: Maja Matulić (mentor)
• Član povjerenstva: Maja Matulić (predsjednik povjerenstva)
• Član povjerenstva: Ivan Radosavljević (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Goran Klobučar (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Jasna Hrenović (član povjerenstva)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prirodoslovno-matematički fakultet; (Biološki odsjek); Zagreb
• Datum i država obrane: 2018-01-26, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: PRIRODNE ZNANOSTI; Biologija

Sažetak

Maligni tumori su, uz bolesti krvožilnog sustava, glavni uzrok smrtnosti ljudske populacije. Štetne popratne pojave i razvoj otpornosti tumora na lijekove glavni su problem uspješne kemoterapije. Potreba za učinkovitijim i manje štetnim spojevima, potencijalnim novim kemoterapeuticima, je zato velika. U ovom diplomskom radu je istraženo biološko djelovanje seskviterpen laktona raguzinina, izoliranog iz hrvatskog endema Centaurea ragusina L. (dubrovačka zečina). Biološki učinak seskviterpena raguzinina na ljudske stanice tumora vrata maternice (HeLa) istražen je korištenjem kolorimetrijske metode MTT (3-(4,5- dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazoli bromid) te je pokazano njegovo toksično djelovanje s IC50 kod 2,2 μM. Nadalje, korištenjem protočne citometrije pokazano je da raguzinin zaustavlja stanice u fazi G2 ciklusa stanice, te potiče apoptozu. Pojava apoptoze potvrđena je bojanjem stanica s propidij jodidom i Annexin-om V označenim fluorescein izotiocijanatom. Međutim, Western blot metodom se nije utvrdilo cijepanje opće prihvaćenih biljega apoptoze, kaspaze 3 i proteina PARP. Dobiveni rezultati ukazuju na mogućnost da raguzinin potiče apoptozu neovisnu o kaspazama. Pomoću specifičnih prekursora i inhibitora sinteze glutationa i molekula uključenih u njegov metabolizam pokazano je da je glutation uključen u mehanizam smanjenja citotoksičnosti raguzinina kod stanica HeLa, te da je njegova uloga u tom procesu detoksikacijska, a ne stabilizacija oksidativno-reduktivnog sustava stanice.

Sažetak (engleski)

Malign tumours are, along with cardiovascular diseases, the main cause of death of human population. Harmful consequences and development of drug resistance are the main problems of successful chemotherapies. There is a big need for more efficient and less harmful substances, potential chemotherapeutics. In this thesis, biological effect of sesquiterpene lactone isolated from Croatian endemic plant Centaurea ragusina L. (dubrovačka zečina) was examined. Biological effect of sesquiterpene lactone ragusinin on human cervical carcinoma (HeLa) cell line was examined using colorimetric assay MTT (3- (4,5-dimetyilthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoli bromide) and the half-maximal inhibitory concentration (IC50) of the ragusinin was obtained at 2,2 μM. We also analysed the cell cycle progression by propidium iodide staining using flow cytometry. The obtained data indicated ragusinin as a potent inducer of apoptotic cell death and as a trigger for increase in G2 phase population. The ability of ragusinin to induce apoptosis of HeLa cells was examined by Annexin V-FITC Assay using flow cytometry. The cleavage of caspase 3 and PARP was not detected indicating that ragusinin triggers caspase-independent cell death. Using specific precursors and inhibitors of glutathione synthesis and of other molecules involved in glutathione metabolism, it was shown that glutathione is involved in the mechanism of ragusinin cytotoxicity inhibition probably through detoxification mechanism, and not by stabilization of oxidative-redox system in the cell.

• Ključne riječi: seskviterpen lakton; tumor; kemoterapija; citostatik; HeLa; raguzinin
• Ključne riječi (engleski): sesquiterpene lactone; tumour; chemotherapy; cytostatic; HeLa; ragusinin
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:217:375237
• Studijski program: Naziv: Molekularna biologija; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: diplomski; Akademski / stručni naziv: magistar/magistra molekularne biologije (mag. biol. mol.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup; Datum isteka embarga: 2018-07-26
• Datum i vrijeme pohrane: 2018-03-15 11:36:02