Enzimska karakterizacija piruvat-kinaze bakterije Bacillus subtilis

diplomski rad

• Naslov (engleski): Enzymatic characterization of Bacillus subtilis pyruvate kinase
• Autor: Kristina Kovač
• Mentor: Damjan Franjević (mentor)
• Mentor: Ivan Mijaković (sumentor)
• Član povjerenstva: Damjan Franjević (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Ivan Mijaković (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Zdravko Dolenec (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Branka Pevalek-Kozlina (član povjerenstva)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prirodoslovno-matematički fakultet; (Biološki odsjek); Zagreb
• Datum i država obrane: 2012, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: PRIRODNE ZNANOSTI; Biologija

Sažetak

Piruvat-kinaza je ključni enzim glikolize i metabolizma ugljika. Katalizira završni korak glikolitičkog puta, prenoseći fosforilnu skupinu fosfoenolpiruvata (PEP) na ADP, stvarajući ATP i piruvat. Reakcija je ireverzibilna, te predstavlja važno regulatorno mjesto u glikolizi. U ovom istraživanju piruvat-kinaza je izolirana iz aerobne Gram-pozitivne bakterije Bacillus subtillis, te pročišćena metodom afinitetne kromatografije do homogenosti. Enzimska rekacija se odvijala pri pH 7.5, uz prisustvo supstrata (PEP i ADP), te iona - K+ i Mg2+ koji s ADP-om tvori Mg2+-ADP kompleks, koji djeluje kao pravi substrat enzimu. Cilj istraživanja je bio utvrditi kinetičke parametre – Km i Vm piruvat-kinaze. Eksperimentalni podaci dobiveni spektrofotometrijskom metodom prikazani su Michealis-Menten modelom enzimske kinetike, te su pomoću linearizacijskih prikaza izračunate vrijednosti Km=1,2138 mM, Vm=227,062 μmol NADH/min/μg proteina za ADP, te Km=0,9081 mM, Vm=97,1125 μmol NADH/min/μg proteina za PEP. Navedeni su rezultati dobiveni Hanes-Woolf linearizacijskim prikazom.

Sažetak (engleski)

Pyruvate kinase is key enzyme in glycolysis and carbon metabolim. It catalyzes the final step of glycolytic pathway, transferring phosphoryl group of phosphoenolpyruvate (PEP) to ADP, yielding ATP and pyruvate. Reaction is irreversible and it represents important regulatory point in glycolysis. In this research pyruvate kinase is isolated from aerobic Gram-positive bacteria Bacillus subtilis and purified to homogenity. Enzymatic reaction proceeded at pH 7.5 in presence of substrates (ADP and PEP) and ions - K+ and Mg2+. Mg2+ creates a Mg2+-ADP complex with ADP, which acts as a true substrate of the enzyme. Goal of this research was to identify kinetic parameters - Km i Vm of pyruvate kinase. Experimental data given by spectrofotometric method are shown with Michaelis-Menten model of enzyme kinetics. By means of linear plotting, values were calculated to Km=1,2138 mM, Vm=227,062 μmol NADH/min/μg protein for ADP and Km=0,9081 mM, Vm=97,1125 μmol NADH/min/μg protein for PEP. Mentioned results were given by Hanes-Woolf linear plot.

• Ključne riječi: piruvat-kinaza; enzimska karakterizacija; Bacillus subtilis
• Ključne riječi (engleski): pyruvate kinase; enzymatic characterization; Bacillus subtilis
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:217:787265
• Studijski program: Naziv: Profesor biologije; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: dodiplomski; Akademski / stručni naziv: magistar/magistra edukacije biologije (mag. educ. biol.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup
• Datum i vrijeme pohrane: 2018-04-18 11:34:27