Otkrivanje i važnost retrovirusne reverzne transkriptaze u staničnim kulturama

disertacija

• Naslov (engleski): Detection and significance of retroviral reverse transcriptase present in cell cultures
• Autor: Leonida Kutle
• Mentor: Renata Mažuran (mentor); MBZ: 30040
• Član povjerenstva: Dijana Škorić (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Snježana Židovec Lepej (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Dubravko Forčić (član povjerenstva)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prirodoslovno-matematički fakultet; (Biološki odsjek); Zagreb
• Datum i država obrane: 2014, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: PRIRODNE ZNANOSTI; Biologija
• Univerzalna decimalna klasifikacija (UDC): 576 - Stanična biologija. Citologija

Sažetak

Enzim reverzna transkriptaza (RT) sastavni je dio svih retrovirusa i mjerenjem njene aktivnosti može se dokazati prisutnost retrovirusa u biološkim materijalima. Test eng. Product Enhanced Reverse Transcriptase (PERT) vrlo je osjetljiv test kojim se mogu detektirati vrlo niske koncentracije RT u uzorku. Kako bi test bio regulatorno prihvatljiv, potrebno je uvesti standard kao što je RT virusa ptičje mijeloblastoze. Svi testirani uzorci porijeklom s pilećeg supstrata sadrže aktivnost RT, odnosno retrovirusne čestice. Aktivnost RT otkrivena je i u uzorcima diploidnih i kontinuiranih staničnih kultura, te u mediju za rast i održavanje stanica s fetalnim goveđim serumom. Detektirana aktivnost RT ne potječe od infektivnih retrovirusnih čestica, budući da nema porasta aktivnosti RT u indikatorskim staničnim kulturama niti negativno utječe na miševe i zamorčad u testu opće neškodljivosti. Istražen je utjecaj različitih uvjeta proizvodnje cjepiva na pojavnost endogenih retrovirusa u proizvodnoj staničnoj kulturi. Kromatografijom na monolitnim nosačima moguće je koncentrirati i endogene retrovirusne čestice i molekule RT.

Sažetak (engleski)

The enzyme reverse transcriptase (RT) is a part of all retroviruses, and the presence of retroviruses in biological samples can be detected by measuring RT's activity. Product Enhanced Reverse Transcriptase (PERT) test is a very sensitive assay for detection of low concentrations of RT in a sample. To make the assay regulatory acceptable, a standard like avian myeloblastosis virus RT should be included. All of the samples originated from chicken substrate show RT activity. RT activity is detected also in samples from diploid and continuous cell cultures, and in the cell culture media with foetal bovine serum. Detected activity originates from non-infectious retroviral particles, as no rise of the RT activity in indicator cell cultures is detected, nor it negatively affects mice and guinea-pigs in abnormal toxicity test. The effect of various operating conditions during the production of viral vaccines on RT activity was tested. Chromatography on monolithic columns enables concentration of endogenous retroviruses as well as RT molecules.

• Ključne riječi: endogeni retrovirusi; PERT-test; SPF-jaja; živa virusna cjepiva; kromatografija; monolitni nosači; CIM-diskovi
• Ključne riječi (engleski): endogenous retroviruses; PERT assay; SPF eggs; live viral vaccines; chromatography; monolithic column; CIM-disks
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:217:085344
• Studijski program: Naziv: Biologija; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: poslijediplomski doktorski; Akademski / stručni naziv: doktor/doktorica znanosti, područje prirodnih znanosti, polje biologija (dr.sc.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup
• Datum i vrijeme pohrane: 2017-05-22 12:05:32