Kontrola kvalitete stanične terapije autolognim keratinocitima kod zacjeljivanja teških opeklina

diplomski rad

• Naslov (engleski): Quality control of cell therapy with autologous keratinocytes for severe burn wound healing
• Autor: Ivona Arić
• Mentor: Marija Zekušić (mentor)
• Mentor: Inga Urlić (sumentor)
• Član povjerenstva: Inga Urlić (predsjednik povjerenstva)
• Član povjerenstva: Jasna Lajtner (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Sofia Ana Blažević (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Petra Peharec Štefanić (član povjerenstva)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prirodoslovno-matematički fakultet; (Biološki odsjek); Zagreb
• Datum i država obrane: 2021-02-25, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: PRIRODNE ZNANOSTI; Biologija

Sažetak

Lijekovi za naprednu terapiju (engl. Advanced Therapy Medicinal Products, ATMP) pomažu pri liječenju opeklina i rana koje teško zacjeljuju. U Banci tkiva i stanica u Kliničkom bolničkom centru Sestre milosrdnice uzgaja se i klinički primjenjuje autologna suspenzija keratinocita. Duboke dermalne opekline (II B°) i subdermalne opekline (III°) nemaju sposobnost spontanog zacjeljivanja zbog nedostataka keratinocitnih matičnih stanica. Nakon biopsije kože, enzimatskom digestijom se odvaja epidermis od dermisa, a zatim se izoliraju pojedinačni keratinociti i zasijavaju na 3T3 stanice tretirane mitomicinom C koje služe kao hranjiva podloga. Keratinociti se uzgajaju u plastičnim bočicama u mediju koji je obogaćen serumom i faktorima rasta. Klinički se primjenjuju u šprici sa dvokomponentnim fibrinskim ljepilom. Neophodna je kontrola kvalitete tijekom uzgoja koja podrazumijeva provjeru ukupnog broja keratinocita, postotak vijabilnih stanica i klonogeničnosti (holokon, meroklon, paraklon). Udio ostatnih 3T3 stanica u suspenziji određuje se metodom protočne citometrije. U staničnoj terapiji se imunocitokemijskim metodama provjerava prisutnost epitelnih stanica bazalnog porijekla (CK14) te matičnih (p63), proliferacijskih (Ki-67) i diferenciranih (CK19) stanica. Mikrobiološkim kontrolama se dokazuje sterilnost svih staničnih medija te se mjeri koncentracija bakterijskih endotoksina i provjerava odsutnost Mycoplasma spp. Kontrola kvalitete osigurava efikasnu i sigurnu primjenu autolognih keratinocita kao ATMP.

Sažetak (engleski)

Advanced therapy medicinal products (ATMPs) help treat burns and wounds that are difficult to heal. An autologous keratinocyte suspension is cultivated at the Tissue and Cell Bank in Sestre milosrdnice University Hospital Center. Deep dermal burns (II B°) and subdermal burns (III°) do not have the ability to heal spontaneously due to keratinocyte stem cell deficiencies. After skin biopsy, enzymatic digestion separates the epidermis from the dermis and then individual keratinocytes are isolated and seeded onto mitomycin C treated 3T3 cells used as a nutrient medium. Keratinocytes are cultivated in flasks in a serum and growth factors enriched medium. Clinically, they are applied by a syringe using fibrin glue. A quality control during cultivation in necessary and it includes keratinocyte number count, viable cells percentange and clonogenicity (holoclon, meroclone, paraclone). A number of the rest of 3T3 cells in the suspension is determined using flow cytometry. In the cell therapy, immunocytochemic methods are used for determining the presence of basal epithelial cells (CK14) and stem (p63), proliferation (Ki-67) and differential (CK19) cells. Microbiological controls prove the sterility of all cell mediums as well as measure the concentration of bacterial endotoxins and check for Mycoplasma spp. absence. Quality control ensures efficient and safe autologous keratinocytes usage as ATMP.

• Ključne riječi: tkivno inženjerstvo; lijek za napredne terapije; matične stanice; opekline
• Ključne riječi (engleski): tissue engineering; advanced therapy; stem cells; burns
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:217:349088
• Studijski program: Naziv: Molekularna biologija; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: diplomski; Akademski / stručni naziv: magistar/magistra molekularne biologije (mag. biol. mol.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup; Datum isteka embarga: 2023-02-25
• Datum i vrijeme pohrane: 2021-03-08 14:15:59